Pharmaceutical Technology 33 SUPLEMENTO LIQUIDOS 2025 Secuencia de aminoácidos terminales Es necesario evaluar tanto el extremo N como el extremo C del producto para demostrar el grado de homogeneidad en cada caso. El procesamiento postraduccional puede provocar cambios en los extremos (p. ej., extremos irregulares o piroglutaminación del extremo N), y estos deben investigarse. El análisis del extremo N puede realizarse mediante secuenciación en fase gaseosa si existe un grupo amino libre en el extremo N (p. ej., ausencia de piroglutaminación u otro grupo bloqueante), pero no existe un análisis equivalente para el extremo C. Por lo tanto, estas investigaciones terminales se suelen realizar como parte del estudio de mapeo peptídico. Mapeo peptídico El mapeo peptídico es uno de los análisis con mayor cantidad de datos que requiere la ICH Q6B. Esta investigación está, en cierto modo, asociada con el procedimiento de secuenciación primaria de aminoácidos mencionado anteriormente. Sin embargo, el mapeo peptídico se centra en el análisis de masas de péptidos liberados proteolíticamente y su comparación con las masas esperadas. El uso de espectrómetros de masas de alta gama que pueden generar datos de fragmentación en tiempo real permite una confirmación adicional de la identidad de los péptidos detectados. El mapeo peptídico genera una gran cantidad de datos, ya que la combinación de digestión proteolítica específica y el análisis LC-MS en línea de los productos de digestión permite no solo la identificación precisa de la masa de los propios péptidos, sino también la identificación de cualquier modificación postraduccional (Figura 1). Estos pueden ser específicos del proceso de producción en sí (como la piroglutaminación del extremo N, como se observa con frecuencia en los anticuerpos monoclonales [mAb]) o pueden ser el resultado de procesos de purificación (como eventos de oxidación o desamidación de aminoácidos) y pueden indicar que se requiere un cambio de proceso. El mapeo peptídico también genera datos que se requieren para otras áreas de ICH Q6B, específicamente la identificación de la secuencia de aminoácidos terminales y el análisis del puente disulfuro. También identifica los sitios de glicosilación y se puede utilizar para evaluar el grado de ocupación del sitio de glicosilación para las glicoproteínas. Figura 1: Ejemplos de las modificaciones postraduccionales más frecuentes en proteínas. Estas pueden identificarse e investigarse mediante estudios de mapeo peptídico, con una caracterización detallada de glicanos mediante estudios específicos.
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