38 Pharmaceutical Technology SUPLEMENTO LIQUIDOS 2025 la electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio (SDS-PAGE) (o su equivalente capilar más moderno, la electroforesis capilar-SDS) y la cromatografía de exclusión por tamaño (SEC), al compilar un paquete de caracterización robusto para generar conjuntos de datos ortogonales. Gracias a sus mejoras técnicas y metodológicas, las técnicas avanzadas proporcionan información valiosa sobre los perfiles de masa total del producto. Con experimentos adecuadamente diseñados, estos análisis proporcionan datos que serán indicativos de la calidad del proceso de fabricación y del propio producto. Patrones de isoformas El análisis de isoformas de carga proporciona un perfil de especies dentro de la muestra basado en la separación de los diversos estados de carga. Existen numerosos atributos estructurales dentro de una proteína que pueden afectar el perfil de carga; los más frecuentes son la modificación postraduccional (desamidación), la presencia de ácido siálico en glicoproteínas o, en el caso de los anticuerpos monoclonales (mAb), la presencia de piroglutamato o lisina C-terminal de la cadena pesada. La directriz ICH Q6B indica que el patrón de isoformas puede evaluarse mediante isoelectroenfoque u otras técnicas apropiadas. Con frecuencia, se utiliza la técnica capilar de isoelectroenfoque capilar de imagen (icIEF) debido a su velocidad, resolución, reproducibilidad y fiabilidad de la detección UV y fluorescencia para la cuantificación relativa. Los datos generados proporcionan información sobre el perfil de carga, que puede investigarse con mayor profundidad mediante tratamientos específicos de la muestra antes del reanálisis. Esta es otra área donde la recopilación de datos ortogonales genera una comprensión exhaustiva del producto. Por ejemplo, los PTM basados en la carga detectados durante el mapeo de péptidos o los experimentos de análisis de glicanos pueden dar lugar a perfiles de isoformas únicos. Junto con el isoelectroenfoque, la cromatografía de intercambio iónico puede utilizarse para evaluar isoformas, así como patrones cromatográficos. Coeficiente de extinción Es fundamental asegurar la cantidad de producto administrado para garantizar la seguridad del paciente y la generación de datos del bioensayo. Se puede utilizar una lectura común de absorción UV para medir el contenido proteico. Al aplicar esta estrategia, es fundamental determinar el coeficiente de extinción. Esta determinación se puede lograr mediante una combinación de espectrofotometría ultravioleta-visible y un análisis optimizado de aminoácidos, evaluado específicamente en el producto para demostrar su idoneidad. Con frecuencia, esto implica la cualificación o validación del método según las especificaciones de ICH Q2(R2) 5,6. Patrones electroforéticos Algunos aspectos de los requisitos de caracterización estructural especificados
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