42 Pharmaceutical Technology Edición Sudamérica 2025 - N º196 como el pH, el oxígeno disuelto, la agita - ción, la velocidad, los gases e incluso la temperatura, a veces en ciertos tipos de vectores virales - concluye Schrock. Fermentación microbiana Según Mugford, las consideraciones de calidad, como los requisitos de las direc - trices regulatorias y los atributos críticos de calidad, influyen en el diseño y la opti - mización de los procesos de fermentación. En primer lugar, se debe decidir qué cepa microbiana utilizar, dependiendo del tipo de producto que se esté elaborando, ya que cada producto biológico tiene requi - sitos únicos. Según Mugford, las cepas de Escherichia coli (E. coli) modificadas gené - ticamente proporcionan un rendimiento óptimo para proteínas recombinantes o ADN plasmídico. “En la selección de la cepa se tienen en cuenta la solubilidad de la proteína, si se consigue un plegamiento correcto, la ubicación de expresión y si la proteína diana se encuentra en el citoplasma o en el periplasma”, explicaMugford. “También existen cepas modificadas que permiten corregir cualquier sesgo de codón o la formación de enlaces disulfuro. Por lo tanto, la selección de la cepa adecuada es fundamental desde el principio”. El diseño del plásmido también es importante para la producción de pro - teínas, añade Mugford, específicamente la selección del promotor para controlar estrictamente la expresión de los genes que codifican las proteínas. Según Mugford, la productividad tam - bién puede mejorarse mediante la opti - mización de codones del gen de interés y la eliminación de elementos plasmídicos no esenciales. “Además, es posible que se desee una expresión ajustable en casos donde se formen cuerpos de inclusión para la proteína. Se recomienda expresar la proteína más lentamente para minimi - zar la formación de cuerpos de inclusión”. Los productos de ADN plasmídico pre - sentan otros desafíos que requieren aten - ción en la selección de cepas y el diseño de plásmidos, según Mugford. La estabilidad del plásmido puede me - jorarse y la actividad endonucleasa puede reducirse debido a las mutaciones en las cepas de E. colidiseñadas para la produc - ción de plásmidos. Por lo tanto, se utiliza un plásmido con un alto número de copias paramaximizar la productividad. Mugford recomienda el uso de un analizador de fragmentos para evaluar los clones y selec - cionar los más adecuados para producir ADN plasmídico de alta calidad. “Uno de los desafíos que hemos obser - vado en el área del ADN plasmídico es la presencia de elementos repetitivos en el plásmido”, afirma Mugford. Las colas lar - gas de poli(A) son bastante comunes en plásmidos destinados a la transcripción in vitropara producir terapias basadas en ARNmensajero (ARNm), como las vacunas contra COVID-19. Las colas largas de poli(A) son propensas a eventos de recombinación, lo que puede generar cierta inestabilidad en el plásmido y acortar su longitud, dando lugar a pro - ductos de diferente longitud. Esto afecta la integridad del plásmido. Un proceso eficiente de selección de clo -
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