44 Pharmaceutical Technology Edición Sudamérica 2025 - N º196 filtro de profundidad multietapa seguido de filtros de membrana que eliminan las células. Se requieren grandes superficies, lo que genera una gran cantidad de resi - duos. “Especialmente a gran escala, son difíciles de instalar y retirar, etc. Por lo tanto, el tiempo de configuración es difí - cil de reducir”, advierte Giroux. También señala la centrifugación continua como un mejor enfoque, que a menudo utiliza una centrífuga de discos de un solo uso para extraer las células y los componentes densos del medio. “Con la centrifugación continua no se pierde mucho líquido. Por lo tanto, se ob - tiene una suspensión bastante espesa de células. Podría estar compuesta por un 80 % de masa celular y aproximadamente un 20 % de medio”, dice Giroux. Por ejemplo, si el reactor tuviera un volumen celular empaquetado del 8%, básicamente solo se podría eliminar el 2%; se eliminaría el 8% de células y luego el 2% del medio. Por lo tanto, el rendimiento sería muy alto. Generalmente, se utiliza un filtro de profundidad de área muy pequeña, a veces incluso un filtro de profundidad especializado, diseñado para eliminar cualquier célula adicional. Estos filtros pueden cargarse ligeramente y también ayudan a eliminar los residuos. La elección del equipo de reducción de escala correcto es importante a escala de proceso para generar material represen - tativo para la filtración, el replegamiento de cuerpos de inclusión y los pasos de procesamiento descendente, afirma Mugford. Para la recolección de proteína recombinante en E. coli , se suelen utili - zar centrífugas de discos. Un parámetro clave para el escalado y la evaluación del rendimiento de las centrífugas es el factor Q/Sigma, que representa el caudal (Q) y el factor sigma (Σ), según Mugford. “Esto representa la relación entre el caudal Q y el factor sigma, que es el área de sedimen - tación equivalente para una centrífuga determinada”, explica. Es un número fijo para cada tipo de centrífuga, desde peque - ña hasta gran escala, y consideramos que es el parámetro más fiable para ampliar la cosecha de la centrífuga. Para optimizar este paso, normalmente se debe observar el porcentaje de sólidos en la entrada, el caudal y el intervalo de descarga, y el factor de seguridad del recipiente, explica Mugford. Éstos son parámetros y mediciones importantes. Además, se debe monitorear la turbidez del concentrado como una métrica clave para determinar el progreso de la clari - ficación. El porcentaje de sólidos es una métrica clave si se van a transferir, como en los casos en que el producto se encuen - tra dentro de las células. Dado que el ADN plasmídico es sensible al cizallamiento, requiere un enfoque di - ferente para la cosecha. Durante las des - cargas de la centrífuga, el ADN plasmídico puede sufrir daños, lo que resulta en un menor porcentaje de superenrollamien - to, enfatiza Mugford. Mugford señala la filtración de flujo tangencial (FFT) como unmejor enfoque para la cosecha de ADN plasmídico. Mugford afirma que optimizar la FFT requiere seleccionar el tipo de ca - sete adecuado (el tamaño del casete en micras/peso molecular).
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